1.本课题的目的及研究意义研究目的:构建基于mScarlet序列的双荧光报告分子,用于蛋白质相互作用鉴定。
研究意义:利用蛋白质相互作用与荧光报告系统,筛选疾病相关基因的抑制剂或激动剂2.本课题的研究背景荧光蛋白(FPs)已成为生物学研究中不可或缺的一部分。
在从水母Aequorea victoria克隆GFP后,开发了几种GFP光谱变体,包括蓝色,青色和黄色荧光蛋白。
从珊瑚和其他珊瑚虫物种克隆红色荧光蛋白(RFP)同源物后,荧光蛋白的颜色种类大大扩展。
然而,所有Anthozoa RFP形成专性四聚体,其可严重干扰RFP融合蛋白的定位和功能。
四聚体RFP的单体化伴随着亮度骤降和所得单体的不完全和/或部分绿色成熟。
在开发出第一个单体RFP(mRFP)mRFP1后,已经报道了几种改进的mRFP:mCherry,mApple,TagRFP(-T),mKate2,mRuby2,mRuby3和FusionRed13。
但是所有这些mRFP都比它们的四聚体祖先更暗;它们的量子产率低于50%,并且由于不完全或部分绿色成熟以及残留的二聚化趋势,其中一些蛋白还存在其他问题。
FP的光谱变体可应用于基于FRET的生物传感器,以探测活细胞内的分子相互作用,构象变化和代谢物浓度。
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