分选酶A在酵母中的表达及活性验证文献综述

 2022-12-24 16:38:38

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一、拟研究或解决的问题

分选酶A具有膜结合巯基转肽酶催化的功能,是能将一些在细胞质中合成的革兰氏阳性细菌表面致病蛋白锚定到菌体细胞壁上的关键酶,已有研究表明其可以通过大肠杆菌进行原核表达,但后续的蛋白提纯过程耗时耗力。近年来,随着酵母细胞表面展示技术的不断成熟,其在高亲和力抗体及多肽药物筛选等多方面得到广泛应用。通过分选酶A的酵母细胞表面展示,展示酶可方便快捷地进行活性测定和相应抑制剂的筛选。

二、研究手段

1、构建表达载体

利用分子克隆技术构建pPICZalpha;A-Flop1-SrtA重组质粒。

2、导入受体细胞

运用电击法将重组质粒转化到毕赤酵母KM71H感受态细胞中。

3、菌株培养和诱导表达

依次用YPD、BMGY、BMMY培养基进行诱导表达。

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