Htr5a在斑马鱼黑素细胞发育中的作用机制研究文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一、课题拟研究问题

黑素细胞是合成黑素的细胞，其产生的黑素对于恒温动物能防护紫外线对皮肤及DNA的损伤，对于变温动物具有避光和储存热量的作用。研究发现，黑色素细胞损伤,会导致黑色素生成不足,从而引发白癜风等疾病，所以对于黑素细胞发育的研究是很有必要的。

黑素细胞起源于神经嵴，神经嵴细胞在 SCF/c-kit、Wnt 等信号的刺激下分化形成黑素母细胞，后者随即迁移至真皮，再迁入表皮后定居在毛囊。在毛囊内，黑素母细胞分成两群：位于毛囊 bulge 处的黑素干细胞和位于毛母质处的成熟黑素细胞。Sox10不仅在早期胚胎神经嵴发育为黑素细胞方面起作用，并且对黑素细胞的特化、成熟和维持也十分重要，近年来sox10作为神经嵴分化标志物而为人所知; mitfa基因可调控酪氨酸基因家族的表达，从而参与黑素生成的调控，mitfa基因在生物体内能调控黑色素合成的关键限制酶——酪氨酸酶基因的表达，影响黑色素细胞的分化；静息的黑素干细胞具有持续表达dct的特点，即dct的表达与黑素干细胞的发育相关。

斑马鱼胚胎通体透明，黑素细胞在其个体发育过程中易被识别、观察，黑素生成不受毛囊周期的影响，为色素细胞发育的调控机制的研究提供了便利。本研究选取斑马鱼胚胎为实验对象，运用分子原位杂交技术，来探究htr5a突变的斑马鱼胚胎中黑素细胞发育相关基因（sox10、mitfa、dct）表达水平是否发生改变。

二、研究方法和技术路线

本试验按照Westerfild的方法进行原位杂交，步骤如下：

1.收集14 hpf、24 hpf、36 hpf（hours post fertilization）时期的胚胎，胚胎发育不超过24 hpf时，固定胚胎之后撕壳膜，若胚胎发育大于24 hpf，则先撕壳膜后固定胚胎。固定胚胎：将胚胎收集离心管中吸尽水，加入1 mL 4%PFA，换3-4次，室温下固定1-2 小时或4 ℃过夜。

2.胚胎发育为12 hpf及以上，依次用25%乙醇/75%固定液、50%乙醇/50%固定液、75%乙醇/25%固定液和无水乙醇脱水，室温下每次5 min。胚胎在- 20 ℃保存.

3.胚胎发育为12 hpf及以上，室温下用50% PBST / 50%乙醇一次，100% PBST漂洗两次，每次5 min。