利拉鲁肽的培养基优化及摇瓶诱导研究文献综述

利拉鲁肽的培养基优化及摇瓶诱导研究一、研究目的糖尿病作为发病机制复杂的一种代谢性疾病，在临床上有多种药物治疗方法，其中，利拉鲁肽既可以作用于胰岛B细胞，促进胰岛素合成和释放，又可以作用于胰岛A细胞，来抑制胰高血糖素的分泌，具有明显的降糖作用，其降糖作用呈葡萄糖浓度依赖性，在机体血糖水平升高时才发挥降糖作用，而且与其他降糖药物比较，安全性高[1][2][3]。

在工业生产中，一般使用大肠杆菌表达系统来对利拉鲁肽进行表达。

而与大肠杆菌相比，酵母表达系统具有比较完备的基因表达调控机制和对表达产物的加工修饰能力的优点，因此现在酵母表达系统受到越来越多的重视和利用[4]。

然而，尽管真菌表达系统具有诸多优点，在当由实验室扩展到工业规模时，研究人员遇到了困难培养基中，维特质粒高拷贝数的选择压力消失，质粒变得不稳定，拷贝数下降，而拷贝数是高效表达的必备因素，导致产量大幅下降。

随后的研究表明，这一情况很有可能是由于酵母细胞的选择与构建出现了问题而导致的。

为克服这一困难，1983年美国Wegner 等人发展了以甲基营养型酵母（methylotrophic yeast）为代表的第二代酵母表达系统，其中就包括毕赤巴斯德酵母[5]。

在工业生产中，利拉鲁肽酵母发酵培养基的不同配比条件将直接影响表达利拉鲁肽酵母的生长情况[6]，此次设计实验，是为了获得能使利拉鲁肽得到最大的表达量，从而在工业生产中节约成本减少不必要的损失，得到最大的收益。

同时，如何有效并且稳定的监控酵母表达蛋白量也是一个问题。

甲醇是监控表达量的关键因素，它既可以作为碳源供酵母发酵，更关键的是也可以诱导AOXI启动子，从而启动目的蛋白的表达。