dCas9介导的基因沉默在大肠杆菌胞外分泌中的应用文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）一、 研究背景目前利用大肠杆菌表达生产重组蛋白是最广泛使用的生产克隆基因产物的方法，这种方式可以简单的促进蛋白质表达，价格低廉，进行快速的高密度培养，有众所周知的遗传学和大量可用的相容分子工具。

尽管如此，但用大肠杆菌作为宿主进行胞内表达蛋白，翻译后修饰的能力比较差，会产生不正确的折叠或翻译之后形成没有活性的包涵体，常常导致表达的产量低。

鉴于这些缺点，人们开始更多的探究重组蛋白的分泌表达。

目前认为在大肠杆菌中重组蛋白的分泌通常只使用I型和II型分泌途径。

I型分泌途径可将细菌分泌蛋白质直接从胞浆送至细胞外,如大肠杆菌的血溶素。

II型分泌途径则是细菌将蛋白质分泌到细胞周质，经切割、加工之后通过微孔蛋白穿越外膜分泌到胞外。

CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats, 规律间隔成簇短回文重复序列)/Cas系统是一种原核生物适应性免疫防御系统，广泛存在于细菌和古细菌中，由一个成簇规则间隔的短回文重复序列（CRISPR）和附属的蛋白质（Cas）组成，用以抵抗病毒或者质粒等一些外源基因的二次入侵，现在科学家通过改革CRISPR/Cas系统使其成为一种新型的基因编辑工具。

CRISPR-Cas9系统自问世以来一直被广泛地应用于基因组编辑技术中，直到人们通过点突变的方式将Cas9的RuvC和HNH剪切结构域失活得到dCas9后，这个系统又可以被用来调节基因的表达水平。

研究者通过改变gRNA的结构，并与RNA结合蛋白配对，达到影响基因表达的目的。