重组蛋白VEGFⅠ-M2及HSP-GRP6的分离纯化文献综述

一、研究背景

随着医学的进步，一般性传染疾病逐渐被控制，恶性肿瘤已经成为一类常见的且严重威胁人类生命和生活质量的主要疾病之一。手术、化疗和放疗是治疗肿瘤的三大传统疗法，但是它们有很大的局限性。而生物治疗已成为肿瘤治疗的第四大模式，其中肿瘤疫苗是生物治疗的重要组成部分。

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是人体内作用最强的促血管形成因子，它与内皮细胞上的VEGF受体结合后，通过提高内皮细胞的增殖、迁移、渗透和抗凋亡活性，促进肿瘤的新生血管形成，为肿瘤细胞提供足够的营养进行生长、侵袭和转移。相对于抗体和小分子抑制剂等传统抗VEGF药物，采用主动免疫的方法，将突变改造过的VEGF分子作为抗原免疫机体，激发针对VEGF特异性的体液免疫反应和细胞免疫反应，以阻断VEGF信号通路，抑制肿瘤血管的生成，同样可以达到抗肿瘤治疗的目的，并具有独特的优势。

胃泌素释放肽（Gastrin-releasing peptide，GRP）是一种有27个氨基酸的生物活性多肽，主要分布在哺乳动物的胃肠道组织、脑神经组织以及新生儿肺组织中。GRP的生理作用表现在胃肠道激素功能、中枢神经介质功能、黏膜防御和生长因子功能等方面。GRP参与平滑肌的收缩，促进胃泌素、胆囊收缩素、胰高血糖素等的释放，抑制动物的摄食行为；GRP作用于心血管中枢而影响心率和血压，参与体温调节，改善学习和记忆；GRP能保护胃肠道黏膜组织以及及刺激消化道正常黏膜组织的生长等。近年来发现GRP与肿瘤的生长关系密切，人们先后在多种肿瘤组织中证实了BN/GRP受体存在异常表达。大量的研究表明GRP可以通过自分泌和旁分泌途径刺激肿瘤的生长，参与肿瘤新生血管的生成，促进肿瘤的转移等。许多研究表明， GRP及其受体可以作为肿瘤治疗的靶点，通过阻断或拮抗GRP与其受体的结合，肿瘤的生长可以被抑制。本课题以GRP的C端序列为靶点、热休克蛋白65（HSP65）为载体，设计了一种新型的蛋白疫苗HSP65-(GRP-10)₆（HG6）。

二、拟研究或解决的问题

将实验室已构建的重组工程菌pET28a-VEGFI-M2以及pET28a-Hsp-GRP6进行重组蛋白的诱导表达条件优化以及两种蛋白的提取纯化。

三、研究手段

1.重组蛋白生长曲线测定

挑取已鉴定的单菌落，接入含抗生素的LB培养液(Kan 100mu;g/ml)中，37℃培养过夜，再按1%的比例分别种入新鲜培养液(Kan 100mu;g/ml)中，转接后于37℃ 振荡培养, 并于0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24以及25h的时候测定培养液的A600nm值。绘制生长曲线。

2.表达菌诱导浓度测定