中药灵芝液体菌种培养技术及多糖含量测定文献综述

一、课题解决的问题

灵芝自古以来在我国就是一味名贵药材，具有极高的营养和保健价值。近代医学研究发现灵芝多糖是灵芝的主要有效成分之一，具有抗肿瘤，降血糖，抗氧化，增强免疫，促进新陈代谢，延缓衰老等作用。可传统的人工栽培周期长，劳动强度大，且受环境及气候因素大，产量与质量不稳定。目前采用的液体发酵具有周期短、成本低、产量大、适于工厂化生产等显著优点。而液体菌种发酵优化的关键在于液体培养基的优化。本实验的目的是以菌丝体生长状况、菌丝体干量和灵芝多糖为指标，对灵芝菌种液体培养基的碳、氮源及其浓度进行筛选优化，寻找一个最优培养基。

二、研究方法和技术路线

1.将购买的灵芝菌丝斜面菌种转入液体培养基，（进行实验一，共11个培养基）28℃培养6天。观察菌丝体生长（拍照，是否均匀、贴壁），称菌体干重，并测定菌体胞内多糖含量，确定最佳碳、氮源。接着进行实验二，确定碳、氮源的浓度比（进行实验二，共12个培养基）。得出结果后，进行实验三并计算分析。

2.菌体干重测定

取发酵液50ml, 3000rpm/min 离心10min，收集沉淀的菌丝60℃烘干，称重。

3.灵芝多糖提取方法超声波提取

精密称取灵芝菌粉样品, 放入圆底烧瓶,加入适量蒸馏水, 按一定条件(料液比1:15、温度60℃、时间25min、粒度60目) 进行超声波提取2 次, 过滤, 滤液合并, 乙醇沉淀, 得样品粗多糖。

4．灵芝多糖含量测定苯酚-硫酸比色法

对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品100mg, 置于100mL 容量瓶中, 加水适量使溶解,定容。精密吸取上述溶液10mL,定容至100mL容量瓶中, 制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。