开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、研究内容
1 藻蓝蛋白的提取
2 通过离心、两步盐析粗提取藻蓝蛋白
3粗提的蛋白过DEAE-Sepharose Fast Flow 弱阴离子交换柱、Capto-Q 强阴离子交换柱,进一步提纯蛋白
二、实验路线
1、藻蓝蛋白的粗提取
将藻蓝蛋白与0.05M的磷酸缓冲液以1:15的比例(w/v)溶解,反复冻融8到9次,使藻壁充分破碎,藻蓝蛋白溶出。4℃,10000rpm 离心,去掉细胞壁等杂质。调整硫酸铵浓度到30%,去掉一部分杂蛋白,再调整硫酸铵到45%使藻蓝蛋白沉淀,离心得到粗提物。
2、使用DEAE-Sepharose Fast Flow 弱阴离子交换柱进一步纯化藻蓝蛋白
将粗提取的藻蓝蛋白用蒸馏水透析去掉硫酸铵,再用平衡缓冲液透析,过0.8mm滤膜去掉不溶性杂质,上样到DEAE-Sepharose Fast Flow 弱阴离子交换柱,用含有0.1-0.5M的NaCl磷酸缓冲液进行梯度洗脱,收集洗脱样品,测定纯度
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