E3泛素连接酶表达载体库的构建文献综述

一、研究目的E3泛素连接酶由于严格控制泛素化反应的效率和底物特异性，因此是泛素化级联反应的关键组成部分。

本课题将通过重组DNA技术构建E3泛素连接酶的表达载体库，以获得能够表达多种E3泛素连接酶的重组质粒库，用于后续相关疾病发生发展的分子生物学探究。

二、研究方法 ClonExpress技术是一种简单、快速并高效的DNA无缝克隆技术，可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。

将载体进行线性化，在插入片段正/反向PCR引物5′端引入线性化载体的末端序列，使得PCR产物5′和3′分别带有和线性化载体两末端一致的序列（15-20bp）。

将PCR得到的目的基因与线性化载体按一定比例混合后，在重组酶的催化下进行转化，完成定向克隆。

三、文献综述E3泛素连接酶表达载体库的构建【摘要】泛素化修饰是真核细胞内广泛存在的一种修饰形式，受到该修饰的蛋白质分子遍及基因转录、蛋白质翻译、信号转导、细胞周期控制以及生长发育等几乎所有的生命活动过程，对生命体正常功能的发挥具有重要作用。

E3泛素连接酶是泛素化修饰反应中底物特异性的直接决定者，其机制研究可以揭示蛋白质质量控制和生命活动功能的奥秘。

本课题将通过重组DNA技术获得E3泛素连接酶的表达载体库，对进一步研究E3泛素连接酶在疾病发生发展中的作用提供有力的工具和手段。

【关键词】 泛素化；E3泛素连接酶；重组DNA；质粒【正文】1.前言泛素-蛋白酶体系统主要由泛素、E1泛素激活酶、E2泛素结合酶、E3泛素连接酶、26S蛋白酶体和去泛素化酶组成。