千层纸素对AML1-ETO阳性的AML细胞诱导分化作用研究文献综述

课题依据：

AML1-ETO基因是急性髓系白血病AML中常见的融合基因之一，其表达产物为AML1-ETO融合蛋白。大约12%-15%的AML患者有t(8;21),90%的M2b亚型存在AML1-ETO融合蛋白，其阳性可作为M2b的诊断依据。而AML1-ETO阳性的AML患者对化疗较为敏感，部分甚至可治愈，且预后良好。因此，针对AML1-ETO阳性白血病的靶向治疗会有较好的前景。

中药或中药提取物一般具有高活性、低毒性的优点，是当代抗肿瘤药物研究的热点。千层纸素是从中药黄芩中分离得到的一种重要的黄酮类化合物，在植物体内多以游离态或与糖结合成苷的形式存在。大量研究表明，该类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗菌、抗变态反应、抗炎、抗病毒等多种生物活性及药理作用。对人类的肿瘤、衰老、心血管等疾病的治疗和预防也具有重要意义。其抗肿瘤作用机制概括主要有：①抑制细胞增殖，促细胞周期阻滞作用；②促进肿瘤细胞凋亡；③抑制肿瘤血管生成作用；④抑制肿瘤细胞侵蚀作用。

Li等人研究发现，千层纸素对人宫颈癌HeLa细胞的生长有显著的抑制作用，并呈明显的剂量依赖性。也有研究证实，千层纸素具有诱导人胃腺癌BGC-823细胞周期阻滞作用。另外，有文献报导，千层纸素可以诱导人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌HeLa细胞的凋亡。在血液系统方面研究中，郭青龙等研究表明，千层纸素能够抑制VEGF激发的人脐静脉内皮细胞（human

umbilical vein endothelial cells, HUVECs）迁移，也具有一定的剂量依赖性。除此之外，Sun等研究表明，千层纸素能抑制EBK活化，抑制人乳腺癌高转移细胞（MDA-MB-435）基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9两种酶的表达并降低其分泌活性，使得肿瘤细胞穿过人工基底膜的能力下降，进而抑制MDA-MB-435细胞侵蚀转移能力。本课题以AML1-ETO阳性的AML细胞作为研究对象，观察千层纸素的抗白血病作用，探讨其诱导细胞分化的可能途径及分子机制，为今后在白血病治疗中的应用及研发抗急性髓系白血病药物提供理论和实验依据。

拟解决的问题：

1. 千层纸素对AML1-ETO阳性AML细胞活力的影响

本实验通过MTT实验研究千层纸素对AML1-ETO阳性AML细胞活力的影响。MTT法又称MTT比色法（四甲基偶氮唑蓝比色法），是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法灵敏度高、经济实用，已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定。

应注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0.8-1.2范围内。

2、检测千层纸素对AML1-ETO阳性AML细胞增值能力的影响

本实验通过台盼蓝拒染实验检测千层纸素的对AML1-ETO阳性AML细胞增殖能力的影响。正常细胞具有完整的细胞膜结构，而死亡的细胞其细胞膜结构被破坏。台盼蓝无法通过正常的细胞膜因而正常的细胞不被台盼蓝染上，而死细胞则可被台盼蓝染成蓝色。台盼蓝拒染法即利用台盼蓝对活细胞死细胞染色的差异检测细胞存活率的一种快速简便的方法。大致过程如下：