MSC-CM对L929细胞的影响文献综述

一．研究目的：
通过研究MSCs和包含MSCs分泌的可溶性分子的MSCs条件培养基(MSC-conditioned medium,MSC-CM)对小鼠成纤维细胞L929进行诱导培养，探究干细胞上清对于L929细胞的作用，并熟悉掌握细胞实验。

二．拟研究和解决的问题：
间充质干细胞的分离，建立体外培养系统以便MSCs在体外培养系统中进行传代纯化和鉴定，制备包含MSCs分泌的可溶性分子的MSCs条件培养基并采用对照法以确认干细胞上清对L929细胞生长的影响。

三．研究手段及成果形式：
综合运用文献分析法、实验法、实证研究法、仪器分析法等方法。成果以基础研究论文的形式呈现。

四．文献综述：
间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，来源于中胚层的一类具有高度自我更新能力和多向分化潜能的非造血干细胞,主要存在于全身结缔组织、器官间质和骨髓组织中，在特定诱导条件下能分化为成骨、软骨、脂肪、肌肉等多种细胞。MSCs能被募集到炎症环境和损伤组织位点，通过抗炎、旁分泌、增殖、分化等多种作用在损伤组织的修复和再生中扮演重要角色，也是基因传递和细胞治疗的重要工具。近年来，MSCs已成为损伤组织修复、再生等组织工程研究中应用最多的干细胞类型。

L929细胞是小鼠成纤维细胞，是一雄性细胞株，增值速度快，耐受力强，容易培育。培育方法：铺板，传代:如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。冻存: 1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。复苏:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL 培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

研究表明,L929细胞的生长与传代并不是一个孤立的过程,而是建立在L929细胞与周围微环境及机体内环境之间相互作用的基础之上，间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)作为微环境细胞成分和结缔组织的干细胞,成为近年来的研究热点。据目前报道来看,MSCs对L929细胞的增殖和转移具有促进或是抑制作用尚存在争议，基于上述研究背景和本实验室研究基础,本实验拟观察大鼠MSCs上清对小鼠成纤维细胞L929增殖和传代的影响,并对其分子机制进行初步探讨,为进一步研究MSCs在肿瘤细胞发生发展中的作用提供理论依据,有助于发现抗肿瘤生长和转移的治疗的新靶点。

研究方法1.大鼠MSCs的培养、鉴定采用全骨髓直接贴壁法获得原代大鼠MSCs,差速贴壁结合消化控制法纯化细胞,镜下观察细胞形态,流式细胞术检测第5代MSCs的细胞表面标志CD90、CD105、CD34、CD45的表达；分别取第1、4、8代MSCs测定细胞增殖能力,绘制生长曲线；收集MSCs培养上清备用。或直接选用制备好的成品MSCs培养上清。2.大鼠MSCs对L929增殖的影响MTT法检测MSCs对小鼠成纤维细胞L929增殖能力的影响；流式细胞术检测细胞周期变化；Western blot检测MSCs对小鼠成纤维细胞L929蛋白表达的影响

五.参考文献
[1]付裕,滕银燕,徐朝伟,张旭. 骨髓间充质干细胞对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的治疗作用[J]. 中国现代神经疾病杂志. 2012(02)

[2] 徐燕,李长虹,孟恒星,郝牧,邱录贵. 人脐带间充质干细胞分离培养条件的优化及其生物学特性[J]. 中国组织工程研究与临床康复. 2009(32)

[3] Global Cancer Statistics, 2002[J] . D. MaxParkin,FreddieBray,J.Ferlay,PaolaPisani. CA: A Cancer Journal for Clinicians . 2009 (2)