一，论文（设计）选题的依据（选题的目的和意义、该课题在国内外的研究现状及发展趋势、主要参考文献等）
1、选题的目的和意义
蛋白糖基化修饰是特异糖链在细胞内质网中添加到蛋白质上形成寡糖链的过程 ，具有酶定向和位点特异性。根据与蛋白质部分连接方式的不同，蛋白质糖基化修饰分为0-连接和N-连接两种。在本次实习过程中，主要对N-连接进行深入探讨。免疫球蛋白是可溶性血清糖蛋白，可为高等脊椎动物提供针对已暴露抗原的长期保护。人类免疫球蛋白根据重链性质的不同分为IgG 、IgM 、IgA 、IgE 、IgD 5种。其Fc(结晶段 )和Fab(抗原结合段 )均可含有保守的N-糖基化修饰 ,但在糖基化修饰位点和数量上存在着很大差异。连接 Fab 和 Fc 的铰链区则可含有 N- 和 0-连接的糖链。免疫球蛋白中的聚糖具有多种功能：(1) 在维持抗体结构和与血清外源凝集素结合反应中扮演重要角色；(2)维持免疫球蛋白的溶解度、热稳定性和分子构象；(3)促进亚细胞问的运输、分泌和清除；(4)通过 Fc 和 Fc 受体间的有效结合保证免疫球蛋白的功能。多年来，人们已对多种蛋白的糖基化修饰进行了广泛深入的研究 ，并清楚地认识到蛋白糖基化修饰在很多疾病的发生发展 中扮演着重要角色。例如在肝细胞癌(HCC )中甲胎蛋白(AFP )的高岩藻糖基化。IgG是血清中含量最多的免疫球蛋白种类(占人血清 Ig 的 80％) ；是再次免疫应答后形成抗体的主要组分，在机体中发挥重要作用。糖基化在IgG的结构和功能中扮演着重要角色。如：连接在 Asn一297的糖链可维持抗体的四级结构以及Fc 段的热稳定性，并通过影响 IgG 分子与 FcRs 、Clq 以及 FcRn 的结合而分别调节 IgG 分子的抗体依赖细胞毒作用(ADCC ) 、补体依赖的细胞毒作用 (CDC ) 以及半衰期。正常人血清 IgG Fab段的N一糖基化修饰可对抗体的抗原结合功能有明显促进或抑制作用，具体是促进还是抑制？本次试验采取了抗体即YK1004(糖基化和去糖基化）以研究其ADCC和CDC，以求能找到相应结果。糖基化修饰位置上的微小改变即可对糖链的后续加工及抗体的抗原结合活性产生完全不同的影响，因此对糖基化修饰的研究有助于为免疫性疾病监测和肿瘤诊断以及治疗性抗体的优化找到新的方法。实验室利用Fut8-/-DG44工程细胞株，产生与IMB362关键一级结构相同的去岩藻糖抗人GC18A2单克隆抗体，诱导的抗体依赖性细胞杀伤作用（ADCC）和直接细胞死亡效应（CDＣ）均不低于IMB362，等同于IMB362抗体文献数据，用于治疗GC18A2特异性高度表达的胃癌、胰腺癌及甲状腺癌等适应症。
2，该课题在国内外的研究现状及发展趋势
1986年，美国FDA审批了第一个治疗用抗体OKT-3；截止到2012年，美国FDA总共批准了 42种抗体药物上市 ，并有几百个处于不同临床研究阶段。治疗性抗体只有在充分证明其临床使用的安全性 、有效性及生产质量的可控性，才可被批准上市。其作用机制为与靶分子形成复合物 ，引起靶标抗原中和或凋亡，或者通过抗体的免疫效应清除抗原或者病原体。抗体药物与靶分子的特异性结合和活性作用的发挥依赖其复杂的多级结构和翻译后修饰，而糖基化作为抗体最重要的翻译后修饰，对于抗体的生物活性、体内代谢和免疫原性有着重要的作用。抗体糖基化分析及其对药物安全性和有效性的潜在影响已经成为抗体药物质量研究不可或缺的一部分。目前，至少有15种糖基化工程改造的抗体在进行临床试验。
3，参考文献
杨洞庭，宋淑亮， 吉爱国 核心岩藻糖基化控制在治疗性抗体研究中的应用 《生命的化学》 2012 年 32 卷 2 期
衣常红，高春芳 IgG糖基化修饰及其意义研究进展 中国图书分类号 R 392．11 文献标识码 A 文章编号 1000484X (2010 )11-1051-06
黄嘉慧，汪才坤，覃锦红，陈龙冠，黄云娜，谢秋玲 N-糖基化对 TNFＲ-Fc 融合蛋白结构稳定性和生物活性的影响 中国生物工程杂志 China Biotechnology，2016，36( 5) : 12-19
赵子兰，邵勇，高丽华，张连成，胡显文，陈惠鹏 抗 CD20 融合蛋白在 CHO 细胞中的表达及其纯化与鉴定 ［中图分类号］ Q78; R392.1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1009-0002（2012）06-0809-04
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