Gli1与E3连接酶作用区域初步研究文献综述

一、课题研究的背景与资料　　胰腺癌是一种恶性程度极高的消化系肿瘤,且发病率呈逐年增高的趋势,5年生存率小于5%,死亡率居恶性肿瘤死亡率的第四位。

胰腺癌预后差的原因很多,主要还是人们对这种肿瘤的病因及进展、癌转移的详细分子机制缺乏完整的认识,限制了有效治疗方案的制定。

近年来的研究表明，针对Gli1的干预治疗有可能成为治疗胰腺癌的一种新的策略。

本课题组前期研究发现Gli1与泛素E3连接酶相互作用。

但是，E3连接酶对Gli的作用区域尚不得知，所以设计本课题用来研究Gli的泛素化位点，探讨Gli和E3连接酶的具体作用方式，为提出新的胰腺癌治疗靶点提供新思路。

二、课题研究的方法和主要内容　　该课题分为两个部分。

第一部分通过NCBI查到Gli1的全长，然后运用Primer Premier5.0设计合适的引物，进行聚合酶链式反应（PCR）处理，再通过限制性内切酶能够特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异性位点上，并切割双链DNA。

酶切后，进行琼脂糖凝胶电泳实验用于切胶回收，再通过T4 DNA连接酶的作用连接起来而获得重组质粒。

最后进行大肠杆菌DH5alpha;转化实验，将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因。