PcineIL-4细胞系的建立及检测方法文献综述

PorcineIL-4细胞系的建立及检测方法

一、细胞株培养和检测

各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株，都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物性状清楚的细胞群。因此凡符合上述情况的细胞群也可给以相应的名称，即文献中常称之为已鉴定的细胞（Certified Cells）。已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品。细胞系和细胞株在概念有一定的联系与区别：细胞系（Cell Line）：原代培养舞经首次传代成功即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）所组成；细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。当前世界上已建的各种细胞系（株）已难胜数，我国也建有百种以上，并在不断增长中。什么样的体外培养群可被认可为己鉴定的细胞，视具体情况而定，无统一规定。对于用作原代培养的细胞只要供体均一，取材部位及组织种类等条件稳定即可，如用做长期培养，特别是反复传代的细胞，常需做如下说明： 1）组织来源：细胞供体所属物种，来自人体或者动物；个体性别、年龄；取材的器官或组织。如系肿瘤组织，应说明临床和病理诊断，以及病历号等。2）细胞生物学检测：了解细胞一般和特殊的生物学性状，如细胞一般形态，特异结构，细胞生长曲线和分裂指数，倍增时间，接种率等。如为肿瘤细胞，为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性，须做软琼脂培养，异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。3）培养条件和方法；应说明细胞系（或株）适应的生存环境，即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。

二、IL- 4及其研究现状

白细胞介素 - 4(IL- 4)主要是由 T细胞产生的一种细胞因子, 它不仅刺激 B细胞的活化、 增殖、 分化,还与 B细胞以外的淋巴细胞有着密切的关系。 IL- 4是一种具有多种生物学功能的细胞因子^【1】, 主要由活化的 T细胞、 单核细胞、 肥大细胞和嗜碱性粒细胞合成而分泌, 文献报道表达 NK1 . 1的 T细胞、嗜酸性粒细胞及 C/D T细胞也能产生 IL- 4^【2,3】。IL-4能促使静止的 B 细胞表达 MHCH类分子,增强 B 细胞的抗原递呈能力,使免疫系统发生免疫应答; IL-4是 Ig 重链基因类转换的主要调节因子,能促使 B 细胞表达和分泌 lg E ;诱导杀伤 T 细胞及 LA K 细胞的杀伤活性,调节造血细胞的增殖及分化等^【4,5】。因此IL-4是机体产生体液免疫应答的重要调节因子。IL-2 在免疫系统中具有十分重要的免疫生理调节效应 ,它能促进 T 细胞的生长,诱导 C T L 、N K 和 LA K 等多种杀伤细胞的分化和效应功能,并诱导杀伤细胞产生 I FN -gamma;、T N F-alpha;等细胞因子,可增强 C T L 细胞穿孔素基因的表达^【6】。IL-2 可直接作用于 B 细胞,促进其增殖、分化和 I g 的分泌IL-2对 B 细胞的调节作用除通过刺激 T 细胞分泌 B 细胞增殖和分化因子外 ,还可能有直接的调节作用^【4】 。研究发现IL-2 甚至可对神经系统发挥免疫调节作用,是免疫学研究的热点之一^【7】。

三、PorcineIL-4细胞系的建立及检测方法

已有研究表明将编码抗原基因与IL-4基因以融合蛋白的形式在体内表达可以提高抗原的免疫原性,通过IL-4作用还可以促进抗原提呈和抗体应答, 增强机体的保护性免疫效应^【8,9】。Kim^【10】研究也表明IL-4表达型质粒作为DNA 疫苗的免疫增强剂,能增强细胞免疫应答水平。目前,有关人的IL-4基因工程技术研究十分活跃,而在猪上的研究比较少,本课题主要通过猪白细胞介素4（IL-4）细胞系的建立，利用Western Blot方法进行检测。Western Blot与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，探针是抗体，显色用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。既可以定性，又可以半定量的Western是初步鉴定蛋白质最方便也是最通用的方法。 western显色的方法主要有以下几种： 1） 放射自显影 2） 底物化学发光ECL 3） 底物荧光ECF 4） 底物DAB呈色。现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物 鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。

四、实验注意事项

在实习过程中，须熟练并掌握细胞的培养及细胞系建立的具体要求及操作，同时学会并熟练用Western Blot法进行检测。在实验中，要尽快熟悉一些基本的实验操作，养成良好的实验习惯。