开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、研究意义
心脑血管疾病风险的增加与高血脂息息相关,高血脂即血液中脂质或脂蛋白不正常的上升,它能够导致动脉粥样硬化和有关心脑疾病的发生,而这些是世界上主要导致死亡的疾病。固醇调节元素结合蛋白(SREBPs) 作为肝脏脂质代谢和体内平衡调节中的重要转录因子,诱导许多基因参与脂质的合成和脂蛋白的摄取,在脂肪酸、胆固醇等脂类物质代谢过程中发挥重要作用。因此SREBP-SCAP复合体从内质网释放是胆固醇代谢反馈调节的重要节点。SREBP裂解激活蛋白(SCAP)含有胆固醇敏感区,当感受到过多的胆固醇时,它会与保留蛋白质(Insig-1或者-2)相互作用,形成SREBP-SCAP复合体在内质网上。当胆固醇水平低的时候,这个复合体由两种蛋白酶(位点-1蛋白酶和位点-2蛋白酶)加工成成熟结构会运送到高尔基体。SREBP2是该家族重要的成员之一,与胆固醇的合成息息相关,通过调节参与胆固醇合成与吸收的基因的表达,如羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)和低密度脂蛋白受体(LDLR),在脂类物质代谢过程中发挥重要调节作用。所以本次实验重点针对SREBP2的水平来研究苄盐酸丝肼的作用。
二、拟研究的问题
盐酸苄丝肼对动脉粥样硬化中SREBP2水平的影响
三、采用的研究手段
Western blot(蛋白印迹法)测细胞中蛋白质的水平
1.细胞的培养及传代
把细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。.标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到37℃的5%CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。
根据细胞增长速度2-3天换一次培养基。
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