开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、研究意义
1,3-二羟基丙酮(Dihydroxyacetone,DHA),又称丙酮醇,是最简单的酮糖。外观为白色粉末,熔点75~80℃,在 pH 6.0 时稳定。具有特殊臭味,易溶于水、乙醇、乙醚、丙酮。其可食用并且对人体无毒无害。DHA有医药级和化妆品级之分。在化妆品方面,DHA会与人皮肤表面的氨基酸结合,生成褐色薄膜,有防止紫外线伤害和保湿作用[1]。目前国内外主要用微生物发酵法工业化生产DHA。一般会在DHA中加亲水试剂和酯化衍生物,增强DHA的防晒作用,增强晒黑度,并降低DHA长时间放置产生的难闻气味。在医疗方面DHA可用于治疗某些毒性皮肤病和糖尿病,并可作为中间体治疗心血管疾病[2]。此外,DHA可应用于白癜风皮损面积小者的治疗,和日光疹的治疗[3]。DHA还能作为抗病毒试剂,在鸡胚胎培养实验中可杀死半数的鸡瘟病毒。DHA还可用于化工的中间体和农业提高瘦肉率等方面,作用广泛。DHA是一种重要的精细化工产品,可作为农药合成中间体、精细化工原料和医药前体,用途广泛,市场潜力很大[4]。
氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter Oxydans)是一种专性好氧的革兰氏阴性菌,其最适生长温度为25~30°C,最适pH为5.0-6.0。其细胞膜上的脱氢酶可以氧化一系列底物,例如能将D-山梨醇变成L-山梨糖,从D-葡萄糖生成D-葡糖酸和一些5-酮和2-酮葡糖酸,从甘油生成二羟基丙酮(DHA)等。但因其能量多释放入环境中,生物量较低,本课题旨在实验室研究基础上,需对其进行化学诱变,获得高产菌株, 本研究对提高二羟丙酮的生产水平具有重要意义。
二、研究现状
1 .二羟基丙酮生产研究进展
DHA可以用电催化法、化学合成法及微生物转化法等来生产,目前国内外主要采用微生物发酵法。国外在20世纪六、七十年代就开始用微生物生产DHA。其微生物主要以弱氧化醋酸杆菌(Acetobacter Suboxydans) 和氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans) 为主[5,6]。
在G. oxydans 菌中存在两条甘油氧化的途径:(1)甘油直接氧化成DHA,由不依赖于NAD 的膜系甘油脱氢酶催化,最佳pH 为6.0,然后DHA被激酶磷酸化成为磷酸二羟丙酮;
甘油被激酶催化成为甘油-3-磷酸,最佳pH 为8.5,然后被依赖于NAD 的脱氢酶氧化成为磷酸二羟丙酮,磷酸二羟丙酮通过PPP 途径分解代谢。已有研究表明,甘油脱氢酶GDH 是二羟基丙酮合成过程中的关键酶,提高甘油脱氢酶的表达量将提高底物转化的效率[7]。
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