热休克蛋白65的分离及纯化
一、研究背景
热休克蛋白 65 ( Hsp65) 是热休克蛋白60 家族成员 之一 ,由 gro EL2 基因编码 , 是一种高度保守的蛋白质 。 在结核杆菌感染过程中 , Hsp65 是机体
对抗其入侵的重要的免疫保护性抗原之一 ,该蛋白具有很强的免疫原性 ,在被结核杆菌感染的小鼠体内 ,20%的反应性T细胞能够识别 Hsp65〔324〕,这预示着 Hsp65可能是结核病预防和治疗的一个关键因素。
二、拟研究或解决的问题
由于Hsp65蛋白极易降解，因此需要寻找一种方法使得产量提高。本课题基于实验室已制备的含有热休克蛋白65质粒的大肠杆菌，进行活化并培养，探索乳糖诱导的温度，乳糖浓度，诱导时间等对Hsp65蛋白产量的影响，在最适培养条件下大量培养后，继续探索提取该蛋白的合适条件。
三、研究手段
1.热休克蛋白65最适表达条件的探索
含有目的基因的大肠杆菌37℃培养4小时进入对数期，相同温度，相同诱导时间，加不同浓度乳糖诱导，电泳对比蛋白产量，确定最佳乳糖浓度；相同浓度乳糖，相同诱导时间，不同温度诱导，电泳对比蛋白产量，确定最适诱导温度；相同温度，相同浓度乳糖诱导，不同时间取样，电泳对比蛋白产量，确定最佳乳糖浓度；即可确定诱导的最适条件。
2.蛋白分离纯化
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