手足口病相关病毒的分离检测文献综述

拟研究问题：实验室受苏州疾病控制预防中心委托，进行一批疑似病例样本的手足口病相关病毒的分离检测。

研究手段：1 材料与方法1.1 材料1.1.1 细胞及样本人横纹肌肉瘤细胞（RD）由上海巴斯的研究所抗感染免疫与疫苗研究组留存并按本实验室常规方法传代，样本取自苏州市疾病控制预防中心，样本的采集方法储存、运送、处理均按照卫生部《手足口病预防控制指南（2008年版）》执行1.1.2 主要仪器及试剂 PCR仪、紫外凝胶成像系统；细胞培养相关试剂：DMEM、胎牛血清、双抗（青霉素 链霉素，100*）、制菌霉素（100*）。

1.1.3 引物肠道病毒通用引物及型特异性引物按卫生部颁布的《手足口病防控指南》合成, VP1基因扩增引物以EV71BrCr株cDNA序列( GenBank编号AB204853)为模板通过Primer 5.0生物软件设计。

其中肠道病毒通用引物上游为5′-TCCGGCCCCTGAATGCGGCTAATCC-3′, 下游为5′-ACACGGACACCCAAAGTAGTCGGTCC-3′； 产物长为116bp。

EV71型特异性检测引物上游为5′-GCAGCCCAAAAGAACTTCAC-3′, 下游为5′-ATTTCAGCAGCTTGGAGTGC-3′, 产物长为226bp。

VP1扩增引物上游为: 5′-GGGGACAGAGTGGCAGATGTGATT-3′, 下游为5′-GAGCGTAGTGATTGCCGTT-3′, 产物长为891bp。

1.2标本的处理做病毒分离时, 咽拭子在标本保存液中充分搅动(至少40次), 以洗下拭子上黏附的病毒及含有病毒的细胞。

1.3病毒分离RD细胞按本室常规方法传代至6孔细胞培养板,37℃，5%CO2孵箱培养至细胞长成单层, 弃培养液。

将处理后的咽拭子标本液2ml接种细胞。