METTL16稳定过表达细胞株的构建文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）一、课题解决的问题甲基化修饰是调控基因表达、RNA加工、蛋白质功能的重要因素。

甲基转移酶是催化甲基化修饰的主要蛋白分子，甲基转移酶样蛋白（methyltransferase- like proteins, METTL) 是一个通过调节SAM（s-腺苷甲硫氨酸）的浓度来进行甲基化修饰，进而调节RNA、DNA和蛋白质的活性的蛋白家族，其中主要进行RNA的转录后修饰，SAM几乎是所有细胞甲基化的甲基供体，mA RNA甲基转移酶通过调节SAM来促进早期发育。

其中METTL16参与了RNA-mA修饰的催化，在生理和病理过程中发挥了重要作用。

本研究通过阅读文献，深入了解，旨在构建METTL16的稳定过表达细胞株并初步探明其表达情况和功能。

二、实验主要内容1. 搜集相关文献，分析METTL16研究现状，为下一步实验开展做准备。

2. 进行慢病毒包装，构建METTL16稳定过表达细胞株并进行初步功能分析。

3. 对METTL16过表达效率进行检测鉴定。

4. 整理数据，完成论文撰写。

三、研究方法和技术路线1. PCDH-GFP-METTL16质粒的鉴定 提取质粒：按照质粒提取试剂盒进行提取（同时准备空载PCDH-GFP作为对照）2. 慢病毒包装、感染和筛选 提取PCDH-GFP-METTL16、包膜质粒VSVG、包装质粒psPAX质粒，瞬时转染到293T细胞中，24 h后收集上清，离心后使用PEG8000进行浓缩，并于4℃保存待用； 将靶细胞铺于6孔板内，37℃，5% CO培养直到汇合度达到80%-90%，在用DMEM培养基稀释嘌呤霉素并调整浓度，做好标记后将细胞培养基换成有不同浓度梯度嘌呤霉素的培养基培养48 h后挑选出最适浓度，供筛选使用；在37℃，5% CO条件下培养细胞至汇合度达到80%-90%，加入浓缩后的病毒和8 mu;g/mL的polybrene增加病毒感染效率，感染24 h后，更换新鲜培养基继续培养24 h后，加入筛选的最适浓度的嘌呤霉素继续培养数天，正常换液传代，直到细胞稳定不死，即获得稳定的过表达METTL16细胞株。