利用人肝癌细胞株构建Per2启动子驱动的荧光酶素自主生物钟节律报告细胞株的研究文献综述

一、拟解决的问题1、构建Per2启动子驱动的荧光素酶报告基因载体。

2、将上述基因载体导入人肝癌细胞株从而构建自主生物钟节律报告细胞系。

3、检验自主生物钟节律报告细胞系是否构建成功。

二、采用的研究手段1、设计目的基因载体，利用酶切酶连或同源重组技术构建Per2启动子驱动的荧光素酶报告基因载体。

2、将目的基因载体及包装载体通过Lipo转染试剂转染至293T细胞中进行慢病毒的包装，用于感染HepG2细胞株；使用嘌呤霉素筛选表达目的基因的阳性细胞，经过单细胞克隆筛选后得到自主生物钟节律报告细胞系。

3、使用LumiCycle系统对构建好的细胞系进行生物发光记录实验，检测生物钟功能的动态变化。

三、文献综述生物体的各种生命活动都具有昼夜变化，如睡眠-觉醒周期、内分泌激素水平的昼夜波动等，这种行为和生理过程等每日周期性复现的现象被称为生物节律[1]。

从细菌、植物、无脊椎动物到哺乳动物，几乎所有生命的各种行为、生理和代谢功能都具有生物节律[2]，生物的节律受生物钟与外界环境信号的共同调控。

哺乳动物的生物钟系统主要包括位于下丘脑视交叉上核（suprachiasmatic nucleus, SCN）的中枢生物钟和全身外周组织的生物钟[3]。