一、课题研究背景群体感应(quorum sensing,QS)是一种细菌细胞间的信息传递过程,即细菌在生长繁殖过程中通过合成并分泌自诱导物(autoinducer,AI)作为信号分子来检测自身菌群浓度,当AI浓度随着细菌群体密度的增加而达到一定阈值时,细菌便会开启细胞密度依赖的特定基因表达机制。
研究发现革兰氏阴性菌通过群体感应产生N- 酰基- 高丝氨酸内酯类(n-acyl-homoserine lactones,AHLs)化合物来调控与食品腐败、动植物致病性等有关的许多特定的生理性状的表达,如蛋白酶活性、致病因子的表达、生物膜的形成等。
荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)是一种能导致奶类、蛋类、鱼类等蛋白质含量丰富的食品腐败变质的革兰氏阴性菌,近期在我国食品安全事件中频频出现。
本实验以肉桂提取物为群体感应抑制剂,研究其对由于荧光假单胞菌群体感应而产生的腐败作用的影响,从而发现控制食品腐败的新方式。
二、拟研究或解决的问题:(1)研究肉桂提取物对细菌群体感应的抑制作用。
(2)肉桂提取物对荧光假单胞菌致腐能力的抑制作用三、研究过程1、肉桂甲醛提取物的制备a.一定量肉桂树皮于50℃烘箱烘干30min,置于粉碎机中粉碎1minb.称取10g肉桂粉于250mL烧杯中,加入100mL75%的甲醇,600W超声破碎20min,覆盖保鲜膜,静置24h。
分离上清夜常温保存,下层沉淀物加入100mL75%的甲醇继续静置24h。
c.将第一天的上清液与烧杯中的提取液混合,4000rpm离心10min,弃下层沉淀,上清液于旋转蒸发仪35℃旋蒸至干,再加入2%二甲基亚砜,定容至10mL,10000rpm离心3min取上清液。
d.装入灭过菌的离心管中,贴上标签,-22℃冷冻保藏备用。
2、肉桂提取物对紫色杆菌CV026的最小抑菌浓度(MIC)以及生长抑制与群体感应抑制2.1提取物对紫色杆菌CV026的最小抑菌浓度(MIC)的测定紫色杆菌CV026活化以后,按2%接种量接种于灭菌过的新鲜LB培养基。
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