ROS触发释放的聚合物用于乳腺癌基因治疗的研究文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

拟研究的问题:

小干扰RNA(siRNA) 是一种基因药物，它能选择性地靶向信使RNA，结合并诱导靶基因转录后基因沉默，从而有效地抑制目的基因的表达，这一性质为先天性遗传疾病和严重后天获得性疾病的治疗提供了一条富有前景的途径。但siRNA在体内不稳定，易被核酸酶降解，且有触发免疫反应的倾向，因此选择安全稳定的载体将其递送到靶组织靶细胞是实现基因治疗的前提。传统的病毒载体有着致突变和无法装载较大基因等缺点，因此人们开始致力于非病毒载体的研究。其中，阳离子聚合物易于合成与改性，且易与siRNA形成复合物，有着广阔的研究前景。然而，阳离子聚合物也存在着转染效率低、细胞毒性大等缺点，制约着其临床应用。本课题拟通过对阳离子聚合物进行氟化修饰达到提高基因转染能力,降低毒性的效果，并且接入ROS响应键增加其靶向性。

研究方法和内容：

本课题拟在前期合成的小分子CXCR4拮抗剂的基础上进行聚合以及氟化修饰，得到阳离子聚合物F-PCX作为siRNA载体，并通过活性氧（ROS）敏感键链接聚乙二醇（PEG）。在体内循环中，PEG修饰可屏蔽阳离子聚合物的正电荷带来的毒性及不稳定性，并达到长循环的目的。当到达肿瘤组织后，敏感键响应肿瘤部位高水平的ROS导致PEG脱落，从而促进制剂入胞。氟化修饰可提高细胞摄取、溶酶体逃逸以及基因转染能力。

实验内容:

1. 根据实验室前期研究成果合成阳离子聚合物，并对其进行氟化修饰。通过核磁检测确认其结构。
2. 基本表征：
   1. 采用酸碱滴定方法测试材料的质子缓冲能力。
   2. 凝胶电泳法测试未氟化及氟化的材料装载siRNA能力。
   3. 载体—基因复合物的粒径及电位的测量。
   4. 模拟肿瘤细胞中高ROS水平，使用透析法验证复合物去PEG化的过程。
3. 体外细胞学评价:
   1. 采用小鼠乳腺癌4T1细胞进行MTT实验，分别测定氟化与未氟化组材料毒性及载体-基因复合物毒性。
   2. 通过荧光素酶基因沉默能力评价体外基因转染效率。
   3. 通过共聚焦显微镜观察载体-基因复合物的细胞摄取,内含体逃逸情况。
4. 数据整理与分析
5. 撰写论文，准备答辩

工作计划：

2月15日~4月01日 查阅文献，收集整理资料，合成阳离子聚合物并完成氟化修饰。

4月02日~4月15日 完成材料基本表征。

4月16日~5月15日 通过体外实验，测试聚合物细胞毒性，细胞摄取及基因沉默效率等。