利用人肝癌细胞株构建BMAL1启动子驱动的荧光酶素自主生物钟节律报告细胞系的研究文献综述

（详见附件）一、拟解决的问题1、构建BMAL1启动子驱动的荧光素酶报告基因载体。

2、将上述基因载体导入人肝癌细胞株从而构建自主生物钟节律报告细胞系。

3、检验自主生物钟节律报告细胞系是否构建成功。

二、采用的研究手段1、设计目的基因载体，利用酶切酶连或同源重组技术构建BMAL1启动子驱动的荧光素酶报告基因载体。

2、将目的基因载体及包装载体通过Lipo转染试剂转染至293T细胞中进行慢病毒的包装，用于感染HepG2细胞株；使用嘌呤霉素筛选表达目的基因的阳性细胞，经过单细胞克隆筛选后得到自主生物钟节律报告细胞系。

3、使用LumiCycle系统对构建好的细胞系进行生物发光记录实验，检测生物钟功能的动态变化。

三、文献综述地球自转产生昼夜交替，使得地球上的环境因素（尤其是光照）呈现24小时的周期变化，生物体也因此进化出内在的生物节律系统。

生物节律系统影响着人体许多生理现象，如睡眠-觉醒周期、激素和神经活动、体温等，它们在24小时的过程中呈现出节律性变化。

在哺乳动物中，生物钟是一个多振荡网络。