荔枝草中黄酮6-氧甲基转移酶的克隆与功能验证文献综述

开题报告内容：一、选题目的和意义（一）研究目的：验证荔枝草中黄酮6-氧甲基转移酶（F6OMT）的功能。

（二）研究意义：通过转录组数据的筛选以及分子克隆和功能验证有助于从分子水平上揭示荔枝草活性成分粗毛豚草素的形成机制，为利用代谢工程生产粗毛豚草素或提高其产量提供基因资源和技术依据，促进其在医药方面的应用。

二、研究内容和方法（一）研究内容从荔枝草中克隆黄酮6-氧甲基转移酶（F6OMT）候选基因，并对其进行功能验证。

（二）研究方法（1）F6OMT候选基因克隆：从荔枝草中提取其总RNA，利用总RNA逆转录成cDNA，再用设计的基因特异性引物扩增得到F6OMT候选基因。

（2）构建载体和基因表达：将提取的F6OMT候选基因与pET-28a载体连接，构建pET28a-F6OMT重组质粒表达载体，并转入到大肠杆菌感受态细胞中进行转化，筛选阳性克隆。

（3）体外检测酶活性：在含有目的基因的菌液中加入IPTG诱导基因表达，通过超声破碎技术，提取菌液中的蛋白质。

根据反应体系，加入活性蛋白，进行酶催化反应，使用高效液相色谱仪检测反应液的成分，分析F6OMT候选基因活性。

（三）预期结果F6OMT重组基因表达的蛋白对底物黄芩素和野黄芩素具有明显的活性。

三、计划安排2021年1月6日-1月17日 查阅文献，确定选题。