开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
- 拟研究问题
拟设计并合成一种新型荧光探针(NIR-G),该探针具有gamma;-谷氨酰胺转肽酶的催化位点,在gamma;-谷氨酰胺转肽酶催化下会释放出一种荧光色素趋向于扩散到整个细胞质,能够以高空间分辨率和良好的信号稳定性检测gamma;-谷氨酰胺转肽酶活性,用于高度敏感和选择性地检测与癌症相关的生物标志物-gamma;-谷氨酰胺转肽酶。若将其应用于病理组织成像,其具有区分癌细胞与正常细胞的能力则可能解决快速,准确地诊断恶性肿瘤的问题。
- 采用的研究手段
- 实验法
将人正常肝细胞,人神经胶质瘤细胞在37°C下用NIR-G处理30分钟。将癌细胞在37°C下用GGT抑制剂阿西维汀处理30分钟,然后再与NIR-G孵育30分钟。在37°C下用不同浓度的丁酸钠(NaBu)处理人类肝癌细胞细胞6 h,然后再与NIR-G孵育30分钟。 然后通过共聚焦荧光显微镜获得各组细胞的荧光成像图像。
- 文献研究法
通过查阅中外文数据库,收集有关gamma;-谷氨酰转移酶在癌细胞中的表达以及使用gamma;-谷氨酰转肽酶-特异性荧光团对癌细胞、组织进行术中成像等相关信息。
- 定性分析法
GGT活性的荧光检测运用了定性分析法。通过将不同数量酶活力单位的GGT添加到含有NIR-G的 PBS缓冲液(含0.1%DMSO)中。 加入GGT后,将溶液在37°C下孵育25分钟,然后测量溶液的荧光光谱。
三、文献综述
(一)摘要
用来检测肿瘤标志物的小分子荧光探针已经成为肿瘤检测的前沿领域。在许多分析工具中,分子荧光探针是用于检测和成像GGT的最有效的工具。由于其高选择性和灵敏性,可以提供无损分析以及提供原位和实时信息的能力。到目前为止,已经有了几种荧光探针来检测GGT的活性,但是普遍存在成像分辨率低、荧光稳定性较差的问题,这极大地限制了其在长期成像中的实际应用。为了克服这些关键性的缺点,迫切需要一种水溶性探针,其能够在催化GGT时释放出稳定的荧光色素,以高空间分辨率和良好的信号稳定性检测GGT活性。【1】
关键词: 小分子荧光探针;gamma;-谷氨酰转移酶;荧光成像;肿瘤标志物。
(二)引言
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