斑马鱼幼鱼缺氧复氧模型验证文献综述

1. 研究目的

考察应用于治疗人类疾病的临床药物是否能逆转斑马鱼幼鱼模型的相关指标。

1. 研究方法
2. 分组：正常组(Control)；模型组(Model)；阳性药组(Drug) model：阿司匹林、美沙拉嗪、华法林、依那普利、美托洛尔等5种药物。
3. 预防给药：受精后52小时（hours post fertilization，hpf）-56 hpf预防给药4 h（n=30）。
4. H/R造模：24 hpf (Hours post fertilization) 后给予并0.003% PTU水，防止色素生成。48 hpf，在显微镜下观察并将发育良好的胚胎挑出，Tg(cmlc:EGFP) 和Tg(mpx:EGFP)系需在48 hpf挑选有荧光的正常胚胎。将网底24孔板（自制）放入繁殖缸，加入0.003 % PTU水，没过网底，校正好溶解氧测定仪后，放入探头，并设置好阈值。打开磁力搅拌器和氮气阀门，使气体通过气石泵出的气泡缓缓溶解进入水中，将水中的氧气赶出，达到阈值后电磁阀会自动关闭氮气，当空气中的氧气进入水中导致水中溶解氧再次升高时，电磁阀会自动打开，再次通入氮气，维持水中溶解氧在阈值范围。磁力搅拌器有助于保证水中氮气的均匀。用塑料吸管将58 hpf 胚胎小心放入，加盖。到达设定时间后将胚胎吸出，放入网底24孔板，加入正常氧含量的0.003% PTU水进行复氧处理。
5. 指标测定：

4.1心脏功能测定：58hpf幼鱼，持续缺氧法进行缺氧处理，常氧进行复氧造模后分别测定心率、心率不齐指数、FAC（表面积缩短率）、DA（舒张期面积）、SA（收缩期面积）。

4.2炎症浸润定量测定：使用Tg(mpx:EGFP)系斑马鱼幼鱼、58hpf幼鱼，持续缺氧法进行缺氧处理，常氧进行复氧造模后，直接将幼鱼置于荧光显微镜下拍照，对照片进行荧光值的定量分析。

4.3心脏红细胞定量测定：58hpf幼鱼，持续缺氧法进行缺氧处理，造模后将幼鱼吸入2mL EP管中，洗去PTU，吸去多余水后，加入邻联茴香胺染液1.5mL/管，轻柔混匀，避光28°C孵育8 min，用胚胎水清洗3次，置于导致显微镜下拍照，所有操作避光进行。最后对照片进行心脏区域红色面积的定量分析。

4.4静脉淤血定量测定：58hpf幼鱼，持续缺氧法进行缺氧处理，造模后置于显微镜下拍照，对幼鱼的静脉淤血面积进行定量分析。

三．实验安排

2019.3.01-3.31 重复心脏功能造模指标的测定

2019.4.01-4.15 阳性药作用于幼鱼后，其心脏功能和炎性指标的测定。

2019.4.16-4.30 阳性药作用于幼鱼后，其心脏红细胞和静脉淤血指标的测定。

四．结果预测