文献综述
1.研究背景 生物分子的硫酸化在真核细胞中普遍存在,在涉及体内平衡和激素代谢的各种生物过程中发挥着关键作用。
硫酸化是蛋白质、碳水化合物和脂类等物质的一种重要修饰机制,控制着多种生物学过程。
硫酸化的发生依赖于活性硫酸根供体3-硫酸腺苷-5-磷酰硫酸(PAPS),它由PAPS合成酶(PAPSS)负责合成。
PAPS是目前发现的唯一的活性硫酸基团供体,它从细胞质基质中转入高尔基体膜囊内,在酶的催化下,将硫酸根转移到肽链中的酪氨酸残基的羟基上[1],硫酸化的蛋白质主要为蛋白聚糖。
它在生物肝素酶法硫磺化反应中起重要作用,也是体内重要的硫代谢的中间环节产物。
PAPS还存在许多应用,例如磺酸化糖胺聚糖的生物合成[2],血吸虫病治疗药物硫胺硝喹的合成[3],调节植物代谢生长与提高植物代谢产物的合成[4]等等。
但其化学合成成本高,且PAPS是一类高能磷酸化合物,在胞内不能大量累积,在体外不能稳定保存。
因此,本课题拟构建一条体外合成PAPS的途径,通过对ATP硫化酶、APS激酶、无机磷酸水解酶(PPase)合成PAPS的多酶反应体系进行优化,进一步提高PAPS的产量水平,这对于PAPS规模化生产、功能多糖的酶法合成都有非常重要的意义。
2.国内外研究现状PAPS的生物合成主要有两种方式:(1)利用全细胞合成 PAPS。
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