重组人猪嵌合尿酸酶的诱导表达与分离纯化文献综述

实验目的

通过自诱导培养基诱导发酵表达目的蛋白，低温高速离心收集湿菌体、超声破壁、洗涤沉淀、复溶蛋白质，最终获得粗酶液，再经过阴离子层析、亲和层析对其进行进一步纯化，最后成功获得电泳纯的重组人猪嵌合尿酸酶。

背景介绍

一、高尿酸血症

1.1高尿酸血症的定义

在生物体中，核酸降解为嘌呤后经过脱氨和氧化反应生成尿酸。人类和猿类，还有鸟类、某些爬虫类以及昆虫等都是以尿酸作为嘌呤的最终代谢产物，而其他很多生物则能进一步经尿酸氧化酶的氧化作用生成水溶性更好的尿囊素，最终分解成二氧化碳和氨^[1]。尿酸是弱酸，pKa=5.75^[2]。在pH=7.4的生理条件下，98%的尿酸以单钠尿酸盐形式存在，健康状态下，尿酸通过内环境稳态来调节，尿酸的排泄和生成均处于动态平衡。如果内环境稳态失衡，机体内产生尿酸生成与排泄失衡，导致体内尿酸滞留过多，最终形成高尿酸血症。国际上对高尿酸血症的定义为：在正常饮食状态下，男性非同日2次空腹SUA水平gt;420micro;M/L,女性gt;360micro;M/L，即确定为高尿酸血症。高尿酸血症可引起痛风、心血管疾病、中风、肾脏疾病等一系列较为严重的并发症。

1.2高尿酸血症的发病机制

尿酸的过量产生和尿酸的排泄异常为高尿酸血症主要的发病原因。由发病机制不同可以分为原发性高尿酸血症和继发性高尿酸血症。原发性高尿酸血症成因多为基因缺陷导致的嘌呤代谢障碍，常与多种代谢疾病共同出现。继发性高尿酸血症成因多为疾病后遗症或药物的不良反应。

1.2.1尿酸的过量生成

尿酸为肝脏中嘌呤的代谢产物。部分基因缺陷导致的酶失活或缺失使得嘌呤代谢过多而导致尿酸过量生成。