甘露聚糖肽的质量研究文献综述

1. 研究背景

甘露聚糖肽(mannatide)曾用名为多抗甲素(polyactinA，PAA)，是从正常人咽喉部分离的甲型溶血性链球菌33株的深层培养液中经乙醇提取得到的一种alpha;-甘露聚糖肽，是我国首次发明的免疫增强剂类药物，无色、无味的类白色或者微黄色粉末，易溶于水，不溶于甲醇，乙醚等有机溶剂，其化学性质较稳定^[1]。

甘露聚糖肽是由不同链长的甘露聚糖肽分子组合在一起形成的混合物，不存在小分子糖类和游离氨基酸，其主要结构为多肽链与甘露聚糖连接。甘露聚糖肽中的糖链主要以N-糖苷键和O-糖苷键与肽链相连接。在O-糖苷键连接的结构中，主要是糖链还原末端的甘露糖基，以糖苷键形式通过肽键上的羟基氨基酸(如丝氨酸、苏氨酸、羟脯氨酸或羟赖氨酸)的羟基氧与甘露聚糖连接，组成聚糖肽。N-糖苷键连接的结构中，糖链还原末端可以与肽链中的赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸的氨基连接^[2]。

甘露聚糖肽中主要为甘露糖和少量的葡萄糖残基，比例为39:1，其总糖量为87.7～90.3%。甘露聚糖肽中的甘露聚糖主要以beta;-（1-4）键连接组成其聚糖主链，除此外糖链中还存在1-6、1-2等支链结合方式和还原末端。甘露聚糖肽中蛋白质含量为4.5～6.2%，其主要氨基酸构成为天门冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸、亮氨酸、丝氨酸，它们的比例为1:2:2:1:1:1.，除此之外还有少量的甘氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、精氨酸、赖氨酸等^[3]。

甘露聚糖肽具有提升外周白细胞，增强网状内皮系统吞噬功能，活化巨噬细胞及淋巴细胞，诱导胸腺淋巴细胞产生活性物质，改善和增强机体免疫功能和应激能力；具有激活吞噬细胞、NK和T、B细胞亚群作用；具有诱生干扰素和白介素等作用，可诱生多种效应细胞和细胞因子产生，“细胞因子鸡尾酒”效应，广谱杀灭病毒、致病菌以及广谱诱导瘤细胞凋亡。临床常用于治疗或辅助免疫功能低下导致的各种疾病，如慢性支气管炎、肺结核、带状疤疹、梅毒、再生障碍性贫血和各种肿瘤等^[4-5]。

目前关于甘露聚糖肽的研究主要集中于其生物活性及临床应用，对其质量控制研究较少。现有文献报道甘露聚糖肽产品的检验标准中只包含性状、鉴别、检查、甘露糖含量测定项，客观而言，现行标准难以全面反映产品的内在质量^[6]。本课题将进一步对甘露聚糖肽的质量控制进行研究，其中包括从多糖、多肽和糖苷键等角度对其进行鉴别并使用多种方法测定其多肽含量、分子量及其分布，以期建立有效的质量控制方法，提高其现有标准。

二、研究目的与意义

本课题将对甘露聚糖肽的质量控制进行研究，其中包括从糖肽和糖苷键等角度对其进行鉴别并使用多种方法测定其多肽含量、分子量及其分布，以期建立有效的质量控制方法，提高其现有标准。

三、实验方案设计

1. 基于糖肽特征鉴别甘露聚糖肽

1.1 HPLC-RID-DAD双检测法